Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
# Условия хроматографирования, такие, например, как размер колонки, скорость подвижной фазы, объем вводимой пробы и другие параметры, обозначенные в частной статье, не являются строго регламентированными и могут варьировать. При этом должны выполняться условия теста «Пригодность хроматографической системы» (2.2.46), и данный тест может учитывать влияние таких изменений на полученные результаты.
Определение относительного компонентного состава смесей
Распределение проводят, как описано в частной статье. При возвожности записывают хроматограмму, полученную в процессе распределения, и измеряют площадь соответствующих пиков. Если чувствительность одинаковая для всех компонентов пробы (например, они имеют одинаковое удельное оптическое поглощение), относительное содержание каждого компонента рассчитывают как отношение площади пика соответствующего компонента к сумме площадей пиков всех компонентов. Если для разных компонентов пробы чувствительность разная, содержание каждого компонента рассчитывают с помощью градуировочных графиков, полученных с использованием соответствующих стандартных веществ для градуировки, как указано в частной статье.
Определение молекулярных масс
Эксклюзионная хроматография может быть использована для определения молекулярных масс веществ путем сравнения с соответствующими стандартными веществами для градуировки, указанными в частной статье.
Для молекулярных масс стандартных веществ строят график зависимости объема удерживания от логарифма молекулярных масс.
График, выстроенный в пределах, ограниченных значениями объема эксклюзии и полного объема проникновения обычно приближается к прямой линии для данной колонки в данных экспериментальных условиях. На основании этого графика могут быть рассчитаны молекулярные массы. Использование метода градуировки для молекулярно-массового разделения позволяет получать достоверные результаты лишь для частных случаев систем высокомолекулярное вещество/растворитель в описанных экспериментальных условиях.
Определение молекулярно-массового рапределения полимеров
Эксклюзионная хроматография может быть использована для определения молекулярно-массового распределения полимеров. Однако сравнить между собой результаты можно лишь в одинаковых экспериментальных условиях. Стандартные вещества, используемые для градуировки, и методики анализа описывают в соответствующих частных статьях.
2.2.31. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
ОБЩИЙ ПРИНЦИП
Под действием электрического поля заряженные частички, растворенные или диспергированные в растворе электролита, передвигаются в направление к электроду противоположной полярности, # а молекулы с положительными и отрицательными зарядами передвигаются в направлении их суммарного заряда.
# Скорость передвижения прямо пропорциональна суммарному заряду частицы и обратно пропорциональна ее размеру, либо молекулярной массе.
# Электрофоретическая подвижность является величиной, характерной для данного вещества. Различают абсолютную и относительную электрофоретическую подвижность. Абсолютная электрофоретическая подвижность под влиянием градиента потенциала 1 В на 1 см измеряется в сантиметрах в секунду. Относительная электрофоретическая подвижность есть отношение подвижности исследуемого вещества к подвижности другого вещества, принятого за стандарт.
В гель-электрофорезе движение частиц замедляется взаимодействием с окружающей матрицей геля, что действует как молекулярное сито. Встречные взаимодействия электрической силы и молекулярного сита приводят к диференциации скорости передвижения частиц в зависимости от их размеров, форм и зарядов. В ходе электрофореза из-за различия физико-химических свойств, разные макромолекулярные смеси передвигаются с разной скоростью и, таким образом, разделяются на дискретные фракции. Электрофоретическое разделение может быть проведено в системах без неподвижных фаз (например, свободное разделение раствора в капилярном электрофорезе) и в стабилизированных средах, таких как тонкослойные пластинки, пленки или гели.
# Существует два различных метода электрофореза: фронтальный и зональный. Фронтальный электрофорез проводят в свободной незакрепленной среде, и он является единственным способом определения абсолютной электрофоретической подвижности. Зональный электрофорез проводят в закрепленной среде, роль которой состоит в стабилизации электрофоретических зон.
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ СО СВОБОДНОЙ ИЛИ ПОДВИЖНОЙ ГРАНИЦЕЙ
Этот метод обычно используется для определения электрофоретической подвижности, экспериментальной характеристики веществ, непосредственно измеренной и воспроизведенной. Этот метод обычно применяется для веществ с высокой молекулярной массой, которые имеют малую диффузию. Границы первоначально определяются физическими методами, например, рефрактометрией или кондуктометрией. Под действием определенного электрического поля в течение точно измеряемого времени определяют новые границы и их относительное положение. Условия испытания подбирают так, чтобы можно было определять столько границ, сколько веществ присутствует в испытуемом образце.
